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本制品主要应用于以亚硫酸氢盐处理的DNA为模板的探针法荧光定量PCR。其中SuperQuickStar DNA Polymerase是一种经双单克隆抗体修饰的、全新高效热启动酶，在常温下酶的活性被完全封闭，从而有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，搭配优化的QuickStar Probe Buffer (for bisDNA)包含PCR Buffer、dNTPs和Mg²⁺等，只需客户加入模板，引物，探针即可，使用方便。

• 使用前请在本制品完全融化后上下颠倒轻轻混匀，并经短暂离心后使用。
  
• 避免反复冻融本制品，反复冻融可能使产品性能下降。本制品可置于-20℃长期保存，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。

• PCR反应体系
  

  成分	25μL体系	50μL体系	终浓度
  QuickStar Probe Buffer (for bisDNA)	14μL	28μL	1×
  Forward Primer(10μM)	0.5μL	1μL	0.2μM
  Reverse Primer(10μM)	0.5μL	1μL	0.2μM
  Probe(10μM)	0.5μL	1μL	0.2μM
  SuperQuickStar DNA Polymerase	0.6μL	1.2μL
  Template DNA	X μL	X μL
  ddH2O	至25μL	至50μL

  • 通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1～1.0μM作为设定范围的参考。
    
  • 使用的探针浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
    
  • 通常DNA模板的量以10～100ng基因组DNA或1～10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
• PCR反应条件
  

  步骤	温度	时间	循环
  预变性	95℃	30 s	1
  变性	95℃	15 s	40～45
  退火/延伸	60℃	30 s

  
  
  • 本制品95℃初始变性30s足以使酶激活；复杂模板可延长至3min变性。
    
  • 建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以56℃～64℃的范围作为设定参考。